梯度pcr程序,梯度PCR

梯度pcr程序,梯度PCR

●＾● 梯度PCR操作及维护步骤1目的：正确使用和维护eppendorf梯度PCR仪。 2适用范围：本实验室使用的eppendorf梯度PCR仪。 3负责人：分子诊断组长、质量监督经理4执行人：全部操作（7）DNAgel电泳时添加阳性对照，确保DNAgel和PCR程序不存在问题。 3.PCR产物量太少(1)退火温度不合适。 设计梯度为2度的梯度PCR反应以优化退火温度。 2)DNA模板

梯度退火PCR程序的原理是利用PCR反应中的温度梯度，在不同的温度下将不同的引物与DNA模板结合，从而提高PCR反应的特异性。 在PCR反应中，引物的结合温度非常重要。如果引物(4)的退火温度低，则退火和延伸时间就会长。 应提高退火温度，减少变性和延伸时间，也可采用双温PCR扩增。 设计梯度为2度的梯度PCR反应以优化退火温度。 5)样品部

为了优化退火温度，使用梯度热循环仪模块，可以在整个模块中设置最大和最小温度设置，因此可以同时评估多个孔或反应之间的温度差异。 实际情况中，真正的梯度和精确的孔温控制很难实现，所以建议在PCR优化中‼️分享如何设置梯度PCR程序：首先，选择普通PCR程序，根据酶说明书、自带引物、片段长度设置退火温度和时间。 预变性后，可以插入三步程序，点击退火温度，选择

∩＾∩ 1.打开PCR仪，找到常用PCR程序形式修改（也可以自己重新编辑）2.按回车键打开常用PCR程序，按"编辑"键进入程序编辑状态，按"Tab"键将编辑区域调整到右侧，选择是否执行梯形图（1）梯度PCR仪：可以为一次PCR扩增设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度），我们通常是具有12个温度梯度的普通PCR仪器。 目的：研究未知DNA退火温度的放大。 2）InsituPCR：具有细胞定位能力的原蛋白为