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20ul标准PCR体系 |
pcr反应体系,pcr检测主要是检测什么
1.标准PCR反应系统。标准PCR(PolymeraseChainReaction,聚合酶链式反应)反应系统由缓冲液、脱氧核苷三磷酸、DNA聚合酶、引物、DNA模板等组成。PCR中的各个部分都是标准PCR的反向。 反应体系:10×扩增缓冲液10ul,4种dNTP混合物200umol/Leach,10~100pmol各引物,模板DNA0.1~2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L,加双蒸或三蒸水至100ulPCR反应5
1.标准PCR反应系统PCR反应系统及反应条件-标准PCR反应系统:10×扩增缓冲液10ul4种dNTP混合物200umolLeachprimer10100mol模板DNA012ugTqDNA聚合酶25ug2+15mmolLadd双或三重蒸馏水至100u标准PCR反应系统:10×扩增缓冲液10ul,4dNTP混合物各200umol/L,引物10~100pmoleach,模板DNA0.1~2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L,加双蒸水或三蒸水
染料法(常用SYBRGreenI):在PCR反应体系中添加过量的SYBR荧光染料。SYBR荧光染料特异性掺入DNA双链后,发出荧光信号。未掺入链中的SYBR染料分子不会发出荧光。 任何荧光信号以确保荧光PCR50ul系统PCR10ul系统Taq-Mix25ulTaq-Mix5ul引物(上和下)2.5uleach引物(上和下)0.5uleachTemplateDNA5ulTemplateDNA1ulH2O15ulH2O3ulLabeledPC
˙^˙ PCR反应系统性质和扩增基因组非特异性精品-可编辑-在150μEppendorf管中,添加顺序:ddH2O12.25μl10PCR缓冲液10mMdNTPmixTaq0.25μlPrimergenomicDNA2μl(10-50ug/uPCR反应系统(缓冲液、脱氧核苷三磷酸、引物、模板和DNA聚合酶)1.缓冲液标准缓冲液含有10mMTris·HCl,pH为8.3-9.0(室温),延伸温度(72℃) ),pH值接近
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