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2013年1月,美国两个实验室在《科学》杂志上发表了一种基于CRISPR-Cas9技术的细胞系基因敲除新方法。该技术不同于以往的技术。 CaCRISPR-Cas9利用靶点特异性RNA,是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术。短短几年,CRISPR-Cas9技术就风靡全球,成为现有的基因编辑和基因修饰技术。 它是最高效、最简单、成本最低、最容易的
CRISPR-Cas9技术的操作流程分为四个主要步骤:设计gRNA、构建质粒、转染细胞、识别细胞。 1.设计gRNA:gRNA是CRISPR-Cas9系统识别并切割目标DNA的关键部分。 我们需要针对目标基因。CRISPR/Cas9(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)是使用RNA引导的Cas9核酸酶编辑目标边缘基因的最新技术。 CRISPR/Cas9是细菌和古菌反应病毒
CRISPR-Cas9技术利用与目标序列互补的agRNA,引导Cas9核酸酶识别并切割特定的目标DNA,造成DNA的双链或单链断裂。然后,细胞会利用自身的双链DNA修复机制来修复DNA。 断裂的DNA被修复,一般由病毒载体和非病毒载体来运输。载体技术越来越成熟,非病毒载体也越来越多样化,包括脂质基纳米载体、聚合物基纳米颗粒、外分泌体、金纳米颗粒递送系统和仿生纳米材料等。 C
ˇ﹏ˇ CRISPR/Cas9是继锌指核酸内切酶(ZFN)和"类转录激活子效应核酸酶(TALEN)"之后的第三代"基因组定点编辑技术"。CRISPR/Cas9具有成本低、操作简单、效率高、速度快的优点。CRISPR/Cas技术的原理。CRISPR/Cas9系统的工作原理是crRNA(CRISPR衍生的RNA)与tracr结合RNA(反式激活RNA)通过碱基配对形成tracrRNA/ crRNA复合物。该复合物引导核酸
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