pcr产物电泳的注意事项
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一段基因的引物如何设计 |
pcr多个条带,pcr有杂带的原因
质粒PCR后电泳出现多条带最常见的原因是:1)引物特异性不好;2)退火温度太低;3)PCR系统有问题。 结果表明,PCR-DGGE分析中出现多条带的原因可能是作为PCR扩增模板的DNA与少量其他DNA片段混合,多条带现象不易消除。在DGGE分析凝胶上对DNA片段进行测序时,DNA片段返回
如果浓度过低,会影响PCR扩增产率,甚至导致PCR扩增失败而不扩增条带。 反应体积的变化:通常用于PCR扩增的体积为20ul、30ul和50ul。 还是100ul,PCR扩增用什么体积根据科研和临床检测的不同目的1.重新设计引物或使用嵌套式PCR2.适当降低模板或引物浓度3.适当减少酶用量4.降低镁离子浓度5.适当提高退火温度或采用两段温法6.减少循环次数s.如果条带不是很亮,可以省略。
ˇωˇ 出现多条带说明PCR反应的特异性不高,可以进行以下优化尝试:1.适当提高PCR的退火温度。 退火温度越高,DNA分子空气停止在一起就越困难。 这样可以减少引物与模板之间PCR扩增产物中出现多条带(杂条带)的原因及解决方案。1)引物用量过大,引物特异性不高。 应更换底漆或减少底漆用量。 2)循环次数
PCR扩增后出现的条带与预期大小不一致,或大或小,或特异性扩增条带和非特异性扩增条带同时出现。 非PCR扩增后出现的条带与预期大小不一致,或大或小,或特异性扩增条带和非特异性扩增条带同时出现。 出现非特异性条带的原因有:一是引物与目标序列不完全互补,或者引物
˙﹏˙ 引物二聚体条带一般在100bp左右,条带弥散模糊。若要去除引物二聚体,可以考虑在体系中添加DMSO、PCR冷启动等。1.引物设计问题:确保引物序列正确且对目标DNA片段具有特异性。 结合。 底漆可以被设计和实验。 2.DNA污染
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标签: pcr有杂带的原因
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