一般冻存不容易死的细胞数量每管在100-200万就够了,一些冻存很容易死的细胞,比如NK92、THP-1、SF9等细胞数量要稍微高点,300-400万左右为宜。冻存液一般1ml左右每管,这个基本每...
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无血清细胞冻存液配方 |
细胞冻存液加双抗吗,无血清细胞冻存液原理
5)双抗体(青霉素-链霉素P/S):青霉素-链霉素混合物,用于抑制细菌生长,避免细胞污染。 建议-20℃冷冻保存以备使用。 4.实验步骤第一次开始培养某种细胞时,一定要检查主要试剂:PBS、培养基、消化酶(胰蛋白酶)、75%酒精、双抗体。 PBS配制:NaCL:4gKCL:0.1gNa2HPO4:1.745gKH2PO4:0.1g三次蒸馏水:500mL,溶解并高压灭菌。 培养基配制:5mL双抗,50mL血清
ˋ▂ˊ 附件:人骨髓:提取骨髓10-15ml,加入100u肝素抗凝剂1ml骨髓,充分混匀,4℃冰箱保存,24小时内分离骨髓MNC。 骨髓先与等量的PBS或Hanks溶液(或培养基)混合,然后加入1份淋巴细胞分离液和2份培养基:我们通常用45mlDMEM+5ml血清+500ul双抗体(反正是这个比例)进行冷冻保存。 :90%血清➕10%DMSO,应在4°保存半小时,然后在-20保存半小时,最后在-80保存(您也可以购买速冻溶液并直接放在-80)。
✔广谱,可替代双抗体,可消除常见的革兰氏阴性和阳性细菌;✔可直接加入血清和培养基中进行B.细胞冻存:冻存液配置:70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO,上述细胞离心后,弃上清,加入适量冻存液
等分并冷冻。 双抗体溶液,硫酸链霉素,青霉素钾盐10000单位,加灭菌超纯水,稀释至刻度,过滤,滤膜灭菌,分装到完全培养基中,不完全培养基中,双抗体溶液保存。 如果完全培养基未完成,则先将每种试剂少量添加:基础培养基、FBS、PBS、完全培养基、无双抗体完全培养基和冷冻液至6孔板中,并置于培养箱中过夜/2天(因为4℃冰箱的低温不利于细菌生长,很难发现涂片。
(2)加入细胞冻存液(一般为10%DMSO+相应细胞的完全培养分辨率),使细胞最终密度(5~10)居中。 3)程序冷却(以需要异丙醇的Nalgene程序冷却箱为例):4℃3)细胞冷冻24小时前,必须用新鲜的细胞培养液培养24小时;4)丢弃细胞培养液,用含双抗体的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶两次;5)将细胞消化液加入细胞培养瓶中,摇匀溶解细胞消化溶液。
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标签: 无血清细胞冻存液原理
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