CHO细胞冻存步骤,贴壁细胞冻存步骤

CHO细胞冻存步骤,贴壁细胞冻存步骤

细胞冷冻步骤：1.冷冻前一天更换一半或全部培养基，观察细胞生长情况。 2、冻存液的配制（使用前配制）：在新鲜培养基中加入DMSO，最终浓度为5-10%，混匀，室温放置备用。强制冻存主要设备：一次性滴管、打火机、酒精灯、大镊子、中镊子、记号笔、废液罐、密封膜、剪刀。 主要试剂：PBS、培养基、消化酶（胰蛋白酶）、75%酒精、双抗体。 PBS制备：NaCL

将细胞悬液转移至1.5mL无菌冻存管中，加入100ul试剂级DMSO，混匀，制备细胞冻存悬液（DMSO终浓度为10%）。 密封后，注明细胞名称、代号和日期，然后冷冻。 传统方法：冷藏管1.需要程序冷却（4℃→-20℃→-80℃→液氮），繁琐、费时、劳动强度大；2.含有血清和细胞污染（病毒、霉菌、支原体等）风险较高；3.血清批次和质量的差异导致冻存方案存在批次差异 ;4.超低温保存要求

╯﹏╰ 本文将与您分享一份细胞培养指南，也是公司同事9年细胞培养经验的总结。内容涵盖了昆虫细胞蛋白表达常用的sf9细胞以及哺乳动物细胞蛋白表达系统的CHO细胞和HEK293细胞。 细胞冻存前培养12-24小时，更换新鲜培养基，保持细胞处于对数生长期。 2.待细胞生长至80%汇合时，用胰蛋白酶消化，吸取新鲜培养基制成细胞悬液，1000rpm离心10分钟。 悬浮细胞直接离心。 3

PCR结果显示，尽管CHO细胞中均能检测到四种PDHKmRNA，但PDHK4mRNA水平最低，远低于保持细胞悬浮状态的旋转装置。2种CHO细胞大规模悬浮培养工艺细胞系摇瓶WAVE或种槽接收细胞液体反应器培养1细胞回收v调节水浴温度至37V，取出细胞从液氮罐中取出保存管，然后使用

以下是我的细胞冻存经验，欢迎评论指正。1⃣️丢弃细胞瓶中的培养液，用PBS冲洗两次（小瓶1mL，大瓶2mL）。 2⃣️弃去PBS，加入适量胰蛋白酶（小瓶1mL，大瓶2mL）消化瓶底细胞，直至取出。H9C2细胞冻存步骤：当H9C2细胞生长状态良好时，即可进行细胞冻存。 下面以T25瓶为例。1.收集H9C2细胞并