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动物细胞DNA提取方法 |
提dna蛋白酶k处理多久,核酸提取时蛋白酶K必须加吗
重复洗涤两次,用移液器将上清转移到另一个离心管中,此时上清含有DNA。 05其他提取方法以上操作均为手动提取。此外,您还可以选择使用核酸提取仪进行DNA提取。 一般操作步骤为:提取第二次总DNA(蛋白酶K法)。由于该方法不使用机械力破碎细胞,提取的总DNA较少受到机械剪切,因此该方法提出的DNA用于PCR。 扩增产品一般不含有嵌合体改良
3.加入蛋白酶K进行消化。加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml(约4μl),充分混匀,摇匀37℃12-24小时或37℃1小时,然后56℃水浴3小时。 在孵育过程中偶尔摇动以混合反应溶液。 液体逐渐变得粘稠,表明DNA已释放出来。用蛋白酶K消化细胞,然后用苯酚提取,得到哺乳动物基因组DNA。该方法获得的DNA长度为100-150。
+0+ 蛋白酶K消化蛋白质成分以及样品中可能存在的任何核酸酶。此步骤还可防止DNA降解。 请务必优化您的消化时间! 本发明的第二个目的是提供一种基因组DNA提取试剂盒。该试剂盒包括:以血细胞裂解物为成分的溶液,以细胞为成分的溶液。 裂解液、含蛋白酶K的溶液C、含蛋白沉淀剂的溶液、含洗脱液和DNA的溶液
1.4传统DNA提取方法1.4.1蛋白酶K预处理在500μL样品中加入55μL蛋白酶缓冲液和5μL蛋白酶K(20mg/mL),混匀,37℃孵育4h~确保酶消化反应完全。 1.4.2饱和SDS-蛋白酶K-苯酚提取DNA的一般过程苯酚提取法是在含有SDS(十二烷基硫酸钠和蛋白酶K)的溶液中消化并分解蛋白质,然后用苯酚和氯仿提取DNA。 /异戊醇提取并分离蛋白质,所得DNA溶液用乙醇沉淀。
然后加入含有蛋白酶K的EDTA溶液消化去除杂质,然后按照苯酚提取的步骤获得DNA。 EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述问题,达到理想的染色效果。 储存方法:冰箱储存于-20°C,避免反复冻融,有效保质12个月。 孵化温度55-65℃,理想孵化温度58℃
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